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结核性胸膜炎胸液结核分枝杆菌特异性 INF-γ与ADA的相关性

来源:结核一科更新时间:2014-03-17 13:42:55  浏览:

结核性胸膜炎胸液结核分枝杆菌特异性
INF-γ与ADA的相关性

李志惠 崔丹* 赵杰 刘朋冲 张红漫 李毅 冯秀莉

摘要:目的 探讨结核性胸膜炎患者胸液结核特异性INF-γ与ADA的相关性。方法 随机选取120例收住院的胸腔积液患者,其中结核性胸腔积液患者67例,恶性胸腔积液患者42例,其他渗出性胸腔积液患者11例,分为结核组及非结核组。分别在治疗前留取适量胸腔积液进行ADA活性及INF-γ测定,分析胸液INF-γ与胸水ADA的试验相关性,进而探讨其在结核性胸膜炎中的诊断意义。 结果 结核组胸腔积液中ADA活性、INF-γ浓度显著高于非结核组,差异具有显著性(P<0.05)。进一步将结核组胸腔积液中ADA活性、INF-γ浓度进行相关性分析,结果呈正相关(P<0.05)。结论 结核性胸膜炎患者胸液INF-γ浓度升高,与胸液ADA活性呈正相关。

关键词:结核性胸膜炎 结核分枝杆菌特异性INF-γ 腺苷脱氨酶 相关性

Correlation of tuberculosis-specific interferon-gamma and ADA in pleural effusion of tuberculous pleurisyLI Zhi-hui ,CUI Dan* ,ZHAO Jie , LIU Peng-chong, ZHANG Hong-man, LI Yi, FENG Xiu-li, *He Bei Chest Hospital, He Bei Province,Shijiazhuang 050041,China

Abstract: Objective To evaluate the associations between tuberculosis-specific interferon-gamma (INF-γ)and  ADA in pleural effusion of tuberculous pleurisy . Methods  Selected 120 cases of pleural effusion patients randomly, among the 67 patients with tuberculous pleural effusion, malignant pleural effusion in 42 cases, 11 cases of other exudative pleural effusion patients, divided into tuberculosis and non tuberculosis group. The ADA activity and INF-γlevel were measured before  the treatment, analysis the correlation of INF-γand ADA in pleural effusion,and explore the diagnostic value in tuberculous pleurisy. Results  The ADA activity and INF-γlevel in tuberculous pleural effusion were significantly higher than those non tuberculosis group (P<0.05).The ADA activity were significantly associated with INF-γ level in tuberculous pleurisy. Conclusion  The expression of INF-γwas increased in tuberculous pleurisy.,and correlated with ADA activity.

Key words: tuberculous pleurisy tuberculosis-specific; interferon-gamma; adenosine; deaminase,ADA;  Correlation

研究显示,近年来结核性胸膜炎发病呈上升趋势,占整个胸膜疾病的49.6%[1-3]。。结核性胸膜炎是结核分枝杆菌感染引起的胸膜以炎性渗出为主要病变的变态反应性疾病。诊断结核性胸膜炎的传统方法都效率较低,近年来采用酶联免疫斑点方法(Elispot)法检测结核性胸腔积液单个核细胞中的结核特异性INF-γ释放水平,在结核性胸膜炎诊断中显示出较好的应用前景[4-5]。本研究通过检测胸液特异性INF-γ与ADA含量,分析结核性胸膜炎胸液特异性INF-γ与ADA的相关性,进而探讨其在结核性胸膜炎中的诊断意义。

资料和方法

一、临床资料

2012年3月至2013年3月在我院门诊收入院的胸腔积液患者120例,其中无严重的心、肝、肾功能不全,无糖尿病,无合并HIV感染,无系统性红斑狼疮等风湿免疫性疾病。选例标准如下:(1)结核性胸膜炎67例,其诊断标准如下:①胸部影像学检查可见结核活动病灶; ② 临床有发热等结核中毒症状; ③PPD强阳性; ④ 胸腔积液抗酸染色阳性或胸膜活检证实; ⑤ 抗结核治疗临床症状好转,胸水吸收。67 例患者均符合上述5 项诊断条件中的第① ~③ 项或第④ ~⑤ 项中的任一项。(2)恶性胸腔积液42例,均有明确细胞学或病理学诊断依据 (3)其他渗出性胸腔积液11例,其中肺炎伴胸腔积液10例,肺栓塞引起的胸腔积液1例。120例患者其中男65例,女55例,年龄18~73岁,平均年龄 49.73岁,将上述病例分为结核组67例(结核性胸膜炎组)和非结核组53例(恶性胸腔积液组及其他)。

二、研究方法

1.标本采集:患者均于治疗前行胸腔穿刺并留取胸腔积液15ml置于无菌管中,2500转/min,离心5min,留取上清液15ml置于-20℃以下冻存,待测。

2.试验方法

2.1 ADA 采用酶比色法检测其活性,试剂盒由北京中山生物有限公司购置

2.2Elispot检测胸液单个核细胞INF-γ释放水平

2.2.1标本的处理:取胸水15ml,肝素抗凝,分离单个核细胞用细胞培养基AIM-V重悬细胞,在已包被抗IFN. 单抗的96孔板上,分别加入50µl细胞培养基作为空白对照,50µl植物血凝素作为阳性对照,分别以50µl结核分枝杆菌特异性ESAT-6和CFP-10肽段库作为刺激原(Oxford Immunote Ltd.,Oxford,UK)。然后在每个孔中加人100 µl上述细胞悬液。把96孔板放在37℃二氧化碳培养箱孵育l6~20 h后,用PBS液洗板4次,加入碱性磷酸酶标记的二抗,在2~8℃ 下孵育1 h。孵育后再用PBS液洗板4次。最后每孔加入50µl显色剂,室温中避光静置7 min后去离子水终止反应。

2.2.2结果判定标准:用ELISPOT计数仪进行斑点阅读与统计。以下两种结果判定为阳性结果:(1)如果空白对照孔斑点数0~5个时,检测孔斑点数减空白对照孔斑点数>6;(2)如果空白对照孔斑点数>6个,检测孔斑点数>2倍的空白对照孔斑点数。

三、统计学方法:

本组数据应用SPSS 18. 0 软件分析处理。计量资料以(x-±s) 表示,计量资料组间均值比较采用t 检验( 方差齐) 或t'检验( 方差不齐) ; 若为偏态分布,采用秩和检验,以P<0.05为差异有统计学意义。同时采用受试者工作特征( receiver operating characteristiccurve,ROC) 曲线评价ADA 活性和INF-γ的应用价值,并进行ADA 活性和INF-γ的相关性分析。

结果

一、两组胸腔积液中ADA、INF-γ检测结果,见表1.结果显示:结核组胸腔积液中ADA水平显著高于非结核组(P<0.05)。结核组胸腔积液中INF-γ水平明显高于非结核组,差异具有显著性。(P<0.05)

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二、ADA、IFN-γ 在结核性胸腔积液中的诊断价值: 以敏感性为Y 轴,1-特异性为X 轴,绘制ROC 曲线。SPSS18. 0 计算,ADA 、IFN-γ 曲线下面积95% 可信区间分别为: ( 0. 898,0. 965 ) ,( 0. 935,0.984 ) 。ADA 的最优截断点为42. 78 U·L - 1 ,灵敏度为82. 21%,特异度为93. 79%; IFN-γ 最优截止点为35 SFCs/2×105PEMC ,灵敏度为93. 92%,特异度为95. 54%。

三、相关性分析,见表2.结果显示结核性胸膜炎胸液中ADA 活性和INF-γ表达显著相关(P<0.05)。

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讨论

结核性胸膜炎以渗出性胸腔积液为主要临床表现,是胸腔积液最常见的病因。 有研究资料显示结核性胸膜炎占内科住院患者3.5%[6] ,占胸腔积液50%左右。结核性胸膜炎是结核分枝杆菌通过血行或淋巴管道播散至胸膜,引起由T 淋巴细胞介导的细胞免疫反应,使得胸膜通透性增加,形成胸腔积液。对于诊断结核性胸膜炎最具价值的传统方法是细菌学检查,胸腔积液中找到或培养出结核分枝杆菌是诊断结核性胸膜炎的金标准,但其阳性率较低;胸膜病理组织活检的阳性率较高,可达50%-80%[7],但为有创操作,且对患者创伤较大。因此寻找一种既减轻患者痛苦又方便高效的诊断结核性胸膜炎的方法显得尤为重要。

腺苷脱氨酶( ADA) 是人体嘌呤核苷代谢中的一种酶,广泛存在于全身各组织中。 其中,淋巴细胞特别是T 细胞内ADA的含量最高。结核性胸膜炎时,T淋巴细胞受到抗原刺激后激活、增殖、分化明显增多, ADA的活性增高,其在胸腔积液中的含量也明显增高。有资料显示结核性胸膜炎中ADA 活性增高, 主要与T 辅助淋巴细胞增多有关[8]。目前认为胸腔积液中ADA 活性升高是诊断结核性胸膜炎的理想指标。本研究结果显示,结核组胸腔积液中ADA 活性为 (50.84± 10.91)U/L, 显著高于非结核组 (13.20± 3.03)U/L 。ADA活性诊断结核性胸膜炎的敏感性为82.81%,特异性为93.79%,表明胸腔积液中ADA 活性升高可作为诊断结核性胸膜炎的重要辅助指标。

IFN-γ 主要由活化的T细胞和NK细胞产生,具有调节免疫系统作用的一个免疫调节因子。在结核感染时,IFN-γ通过刺激巨噬细胞增加一氧化氮的生成而介导巨噬细胞杀灭结核分枝杆菌。IFN-γ可促使产生能识别结核抗原的特异性 CD4+T 淋巴细胞增殖,并动员未活化的 CD4+T 淋巴细胞进入胸膜腔产生免疫反应。结核性胸膜炎时胸液CD4+ T 细胞数量明显增加[9] ,其中增多的 CD4+T 淋巴细胞被认为是IFN-γ的主要来源。因此, 结核性胸膜炎患者局部细胞免疫功能增强,使得胸腔积液中IFN-γ的含量高于外周血中的含量[10] 。因此建立胸液结核杆菌特异性IFN-γElispot检测有着重要意义。

本文研究表ADA、IFN-γ 对结核性胸腔积液均具有较高的诊断价值,胸液中结核分枝杆菌特异性IFN-γ诊断效能较高,其诊断结核性胸膜炎的敏感性为93. 92%,特异性95.54%。从 ADA 活性和INF-γ表达相关性分析来看,结核性胸腔积液胸液ADA活性与结核杆菌特异性IFN-γ表达呈正相关,非结核组胸腔积液ADA活性与结核杆菌特异性IFN-γ表达无明显相关,提示胸液结核杆菌特异性IFN-γ检测可作为结核性胸膜炎的又一重要参考指标。

参考文献

[1] Seiscento M,Vargas FS,Rujula MJ,et al.Epidemiological aspects of pleural tuberculosis in the state of Sao Paulo,Brazil(1998-2005).J Bras Pneumol,2009,35(6):548-554

[2] Trajman A,Pai M,Dheda K,et al.Novel tests for diagnosing tuberculous pleural effusion:What works and what dose not?Eur Respir J,2008,31(5):1098-1106

[3] Gopi A,Madhavan SM,Sharma SK,et al.Diagnosis and treatment of tuberculous pleural effusion in 2006.Chest,2007,131(3):880-889

[4] Lalvani A.Diagnosing tuberculosis infection in the 21st century: new tools to tackle an old enemy. Chest 2007,[3](6):1898-1906

[5] Lee LN .Chou CH ,Wang JY, Hsu HL,Tsai TH,Jan IS,Hsueh PR,Yang PC.Enzyme-linked immunospot assay for interferon-gamma in the diagnosis of tuberculous pleurisy.Clin Microbiol Infect,2009,15(2):173-179

[6]李绍修, 主编. 实用胸腔积液诊疗学[ M] . 北京: 人民军医出版社, 2004: 1.

[7]卜建玲,马玙.结核性胸膜炎的诊断现状与研究进展.中国防痨杂志,2009,31(1):33-36

[8]张敦华, 主编. 实用胸膜病学[ M] . 上海: 上海医科大学出版社,1997: 120.

[9] Gaga M, Papamichali s G, Bakakos P, Lat si P, S am ara I, K oulou ris NG, Alch anat is N, Orp hanidou D. Tuberculous effusion :ADA activity correlates with CD4 + cell numbers in the flu id and the pleura [ J ] . Res pirat ion, 2005, 72( 2) : 160- 165.

[10]  王敬平, 刘东洋, 古淑香, 马. 胸液γ- 干扰素和A-肿瘤坏死因子检测对结核性胸膜炎诊断价值的探讨[ J ] . 中国防痨杂志, 1999,21( 2) : 91- 93.

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